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實驗技術交流

細胞劃痕實例:研究某抗腫瘤藥物對腫瘤細胞遷移的影響

文字:[大][中][小] 手機頁面二維碼 2019/9/3     瀏覽次數:    
1.實驗原理:細胞劃痕法是測定腫瘤細胞運動特性方法之一,其借鑒體外細胞致傷愈合實驗模型,在體外培養的單層細胞上劃痕致傷,加入藥物觀察其抑制腫瘤細胞遷移的能力。
2.實驗材料:
1)細胞系及其培養:肝腫瘤細胞HepG2。
2)24孔板 移液器 倒置顯微鏡。
3)主要試劑:PBS DMEM培養液 0.25%胰酶胎牛血清 5-氟尿嘧啶溶液(1μg/mL)。
3.實驗步驟:
1)制備單層細胞:細胞密度5~10x105/mLHepG2細胞鋪于24孔板(每孔500μL)上,加入含10%胎牛血清的DMEM培養液培養16~24h,使形成單層細胞。
2)劃痕:以5-氟尿嘧啶(5-Fu)為例,首先配制1μg/μL母液(使用無菌蒸餾水配制,精密量取),取45μL該母液用PBS稀釋至1.1mL,得濃度40μg/mL 5-Fu溶液,用10μL移液槍槍頭(或者無菌牙簽)在單層細胞上呈一字劃痕,用PBS清洗3次,然后加入上面配好5-Fu溶液,平行兩個樣本,孵育24h,換成含10%胎牛血清的DMEM培養液孵育24h。
3)觀察并拍照:吸去培養液,用PBS清洗3次,倒置熒光顯微鏡下觀察并拍照。
單層細胞上劃出一道痕的結果圖 加入抑制劑的陽性對照組 未加抑制劑的陰性對照組
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